صباغة البكتيريا ب Gram stain شرح+فيديو

[دلوعة]

صباغة البكتيريا ب Gram stain

1- حضر المواد اللازمة للصباغة
(distilled-water / Iodine / crystal violet / alcohol aceton solution / Safranin / normal saline / wire loop /slid / لهب بنزن / حوض للصباغة )

2- عمل مسحة بكتيرية باتباع ما يلي :
أحضر slide نظبف واكتب علية اسم المريض على طرفة ، وفي منتصف slide ضع قطرة من Normal-saline
حرق wire loop (تعقيمة) وذلك بابقائة على اللهب حتى يحمر
بجانب لهب بنزن افتح طبق بتري المحتوي على البكتيريا المطلوب صباغتها واغرس wire loop في ال Agar بمنطقة لاتحتوي على نمو بكتيري ثم ارفعة
قم باخذ 2-3 bacteria colony وضعهم على قطرة Normal-saline وامزجهم جيدا mix ستلاحظ تعكر Normal-saline
احرق wire loop مرة اخرى واعدة لمكانة واترك المسحة لتجف في الهواء

تحذير لا يجوز استخدام الحرارة لتجفيف المسحة لان ذلك يشوة الخلايا المتواجدة

اجراء عملية التثبيت Fixation للبكتيريا بواسطة لهب بنزن (الحرارة) وذلك بتمرير slide المحتوي على المسحة فوق اللهب من4 الى 5 مرات . ان هذة العملية تساعد على تغيير طبيعة الانزيمات المحللة وذلك بمنع التحلل الذاتي للبكتيريا وكذلك الحرارة تعمل على زيادة الالتصاق الخلايا بالشريحة وعدم اجراء هذة الخطوة يعني خسارة البكتيريا المتواجدة على slide مع اول غسلة لها (وطبعا تكون المسحة البكتيرية من الاعلى وليسة من جهة اللهب)


3- عملية الصباغة :
ضع slide المحتوي على المسحة البكتيرية المطلوب صباغتة على حوض الصباغة(وطبعا الجهة المحتوية على المسحة تكون للاعلى )


اولا : اغمر الشريحة بCreystal violet ذو اللون البنفسجي واتركه لمدة دقيقة واحدة ثم تشطف الشريحة slide بالماء المقطر distilled water وذلك للتخلص من الصبغة الزائدة
ثانياً: اغمر الشرحة ب iodine ذو اللون الأصفر واتركه لمدة دقيقة ثم يشطف بالماء
ثالثا: اغمر الشريحة ب alcohol acetone solution المحضر بنسبة 1:1 ذو اللون الشفاف المستخدم لاستخلاص الصبغة decolorizer وتترك لمدة 30 ثانية ثم تشطف بالماء المقطر
تحذير: إذا زادة المدة عن 30 ثانية سوف يؤدي ذلك لظهور نتائج متغايرة وتحديدا سؤدي ذلك لتحول g+ve إلى g-ve
رابعاً: تغمر الشريحة ب safranin ذو اللون الاحمر الغامق التي تستخدم كصبغة بديلة counter stain وتترك لمدة دقيقة ثم تشطف بالماء المقطر
جفف الشريحة المصبوغة باستخدام ال filter paper
تفحص الشريحة على العدسة الزيتية قوة تكبير 100


النتائج
تصبغ باللون البنفسجي g+ve
تصبغ باللون الاحمر g-ve

لمشاهدة الفيديو انقر الرابط أدناه

http://video.google.com/googleplayer...42274630&hl=en




منقول

[infosniffer]

ما شاء الله الخطوات واضحة تصدقي في بعض الأشخاص الى الأن ما يعرفوا يصبغوا ..
الفقرة الت أعجبني والكثير يقع فيها وهي إطالة مدة الغمر بالكحول حيث أنها تعطي نتيجة ما بين الموجبة والسالبة.

في نقطة مهمة لازم نفرد البكتيريا على الشريحة مزبوط علشان نقدر نصنفها من حيث تجمعها أكان مفردة ثنائية الخ واذا لم تفرد تكون متكدسة جنب بعض ...
infosniffer

[دلوعة]

شكرا على التعليق

والمرور

يسلموا دلوعة .... دائما مبدعة و متميزة



تحياتي
ستالين

بارك الله فيك دلووعة

[دلوعة]

ستالين


خالد

ألف شكرا على المرور

[احمد الاخصائي]

الف شكر دلوعه ويعطيك العافية

[دلوعة]

الله يعافيك أخوي أحمد

[ولد المدينه]

يسلمووو

جميل ماقدمتي

يعطيك العافيه

[دلوعة]

الله يسلمك يارب


ولد المدينة