الرئيسية التحكم التسجيل
 

 
 
العودة   منتديات الكيمياء الحيوية للجميع > الكيمياء الحيوية > تقنيات المعمل - Lab's techniques
 
 

تقنيات المعمل - Lab's techniques الخطوات المعملية و التقنيات و الاجهزه

إضافة رد
 
 
 
أدوات الموضوع انواع عرض الموضوع
 
 
 
 
قديم 02-09-2007, 06:39 PM   #1
yaak
ضيف

 






افتراضي Principle of the PCR

The purpose of a PCR (Polymerase Chain Reaction) is to make a huge number of copies of a gene. This is necessary to have enough starting template for sequencing.

The cycling reactions :

There are three major steps in a PCR, which are repeated for 30 or 40 cycles. This is done on an automated cycler, which can heat and cool the tubes with the reaction mixture in a very short time.

Denaturation at 94°C :
During the denaturation, the double strand melts open to single stranded DNA, all enzymatic reactions stop (for example : the extension from a previous cycle).
Annealing at 54°C :
The primers are jiggling around, caused by the Brownian motion. Ionic bonds are constantly formed and broken between the single stranded primer and the single stranded template. The more stable bonds last a little bit longer (primers that fit exactly) and on that little piece of double stranded DNA (template and primer), the polymerase can attach and starts copying the template. Once there are a few bases built in, the ionic bond is so strong between the template and the primer, that it does not break anymore.
extension at 72°C :
This is the ideal working temperature for the polymerase. The primers, where there are a few bases built in, already have a stronger ionic attraction to the template than the forces breaking these attractions. Primers that are on positions with no exact match, get loose again (because of the higher temperature) and don't give an extension of the fragment.
The bases (complementary to the template) are coupled to the primer on the 3' side (the polymerase adds dNTP's from 5' to 3', reading the template from 3' to 5' side, bases are added complementary to the template)



Because both strands are copied during PCR, there is an exponential increase of the number of copies of the gene. Suppose there is only one copy of the wanted gene before the cycling starts, after one cycle, there will be 2 copies, after two cycles, there will be 4 copies, three cycles will result in 8 copies and so on.



Is there a gene copied during PCR and is it the right size ?

Before the PCR product is used in further applications, it has to be checked if :
There is a product formed.
Though biochemistry is an exact science, not every PCR is successful. There is for example a possibility that the quality of the DNA is poor, that one of the primers doesn't fit, or that there is too much starting template
The product is of the right size
It is possible that there is a product, for example a band of 500 bases, but the expected gene should be 1800 bases long. In that case, one of the primers probably fits on a part of the gene closer to the other primer. It is also possible that both primers fit on a totally different gene.
Only one band is formed.
As in the description above, it is possible that the primers fit on the desired locations, and also on other locations. In that case, you can have different bands in one lane on a gel.



The ladder is a mixture of fragments with known size to compare with the PCR fragments. Notice that the distance between the different fragments of the ladder is logarithmic. Lane 1 : PCR fragment is approximately 1850 bases long. Lane 2 and 4 : the fragments are approximately 800 bases long. Lane 3 : no product is formed, so the PCR failed. Lane 5 : multiple bands are formed because one of the primers fits on different places.


الحقيقه الموضوع هذا عندي زمان بس لقيت انه من الاهميه اني اتحدث عنه .. حيث ان هذي التقنيه تستخدم في كثير من المستشفيات ومراكز الابحاث والمختبرات



من مواضيع yaak في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-10-2007, 07:50 AM   #2
روووح
ملك الكيمياء الحيوية للجميع
 
الصورة الرمزية روووح

 









روووح غير متواجد حالياً
افتراضي

الله يعطيك العاااافيه بداااايه جد قويه
والموضوووع جدا مهم



من مواضيع روووح في المنتدى

التوقيع

الحمدلله
   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-10-2007, 02:56 PM   #3
yaak
ضيف

 






افتراضي

العفو الهـwhidahـويد على ردك الجميل

لا يهم البدايه ان كانت قويه او ضعيفه الاهم ان الموضوع يستفاد منه

انا تعمدت طرح هذا الموضوع وانا على علم بانه يدرس في جميع الاقسام الكيمياء الحيويه وكلية الطب والصيدله .... لكن قدمته هنا باسلوب شخصي لانه يستخدم في مراكز الابحاث والمختبرات بشكل كبير .. سواء بالسعوديه او خارج السعوديه

شكرا على مرورك



من مواضيع yaak في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-10-2007, 03:11 PM   #4
نسايم
المشرفة العامة
 
الصورة الرمزية نسايم

 









نسايم غير متواجد حالياً
افتراضي

اخذناه في ماده تحليله وانته راجعتلي معلومات

يعطيك العافيه

اخي yaak



من مواضيع نسايم في المنتدى

التوقيع


بقضي الليالي أنتظر صابر على المقسوم
متعلـق بطــرف الأمـــل يمكن يجيــني نـــــوم


   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-10-2007, 03:14 PM   #5
yaak
ضيف

 






افتراضي

العفو نسايم

واتمنى ان المراجعه افادتك اختي

شكرا على مرورك



من مواضيع yaak في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-13-2007, 06:46 AM   #6
ملكــة الصــمت
[عضو شرف]
 
الصورة الرمزية ملكــة الصــمت

 









ملكــة الصــمت غير متواجد حالياً
Star إضافة

أخوي yaak

مشكور لطرحك المواضيع المهمة في الحيوي والعلوم المرتبطة به ..

لدي إضافة لموضوعك أتمنى الكل يستفيد منها ...

http://www.wiley.com/legacy/college/...ns/pcr/pcr.htm



من مواضيع ملكــة الصــمت في المنتدى

التوقيع


After great experience with different relations
..
I realize

always family comes first

اتخرجناااااااااااااااااااااااااااااااااا


[glow=FF3366]لا اله الا انت سبحانك اني كنت من الظالمين ...[/glow]
   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-13-2007, 11:31 AM   #7
خالــد
ضيف

 






افتراضي

الله يعطيك الف عافية yaak

للامانة فانت اضافة للمنتدى بمواضيعك الرائعة

الف شكر لك ......

و تقبل تحياتي



من مواضيع خالــد في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-15-2007, 02:33 AM   #9
yaak
ضيف

 






افتراضي

مشكوره ملكة الصمت على الاضافه الرائعه

واسف على التاخير في الرد بس كنت مسافر الحقيقه وكنت خارج الرياض

شكرا



من مواضيع yaak في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
 
 
قديم 02-15-2007, 02:36 AM   #10
yaak
ضيف

 






افتراضي

عفوا اخوي خالد

وشكرا على مرورك يا عزيزي



من مواضيع yaak في المنتدى

   
رد مع اقتباس
 
 
إضافة رد


الذين يشاهدون محتوى الموضوع الآن : 1 ( الأعضاء 0 والزوار 1)
 
أدوات الموضوع
انواع عرض الموضوع

تعليمات المشاركة
لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
لا تستطيع الرد على المواضيع
لا تستطيع إرفاق ملفات
لا تستطيع تعديل مشاركاتك

BB code is متاحة
كود [IMG] متاحة
كود HTML معطلة

الانتقال السريع



الساعة الآن 02:53 PM


Powered by vBulletin® Version 3.8.7
Copyright ©2000 - 2022, vBulletin Solutions, Inc.
يوتك