كواشف النيوكليتدات ثنائية الصبغة

تعتبر كواشف النيوكليتدات ثنائية الصبغة Double Dye nucleotide من اشهر الكواشف الانتقائية على الاطلاق وهي الطريقة المفضلة لدى العلماء الذين بدأوا للتو تطبيق تفاعل التسلسل المبلمر الكمي والنوعي ، وقد ساهمت كل من شركة Roch وشركة Applied Biosystem في تطوير هذه الكواشف من كواشف كانت تستخدم صبغة مشعة ترتبط مع كل كاشف له تسلسل مكمل لأحد الأشرطة الناتجة من التفاعل .


ترتبط صبغة مخلقة اللون Fluorophore – القادرة على اطلاق الفلورسنت – والمسماة الصبغة المراسلة Reporter بالطرف رقم خمسةمن الكاشف ويرتبط بالطرف رقم ثلاثة من الكاشف صبغة اخرى مخلقة للون تسمى الصبغة الماصة Quencher .


عند استثارة الصبغة المراسلة بالليزر او الهالوجين تقوم هذه الصبغة بامتصاص طاقة الفوتونات ومن ثم نقــــــــهلـا الى الــصبـــغة الماصـــة عن طريق ميكـــانـــــكية تحــــــويل الطــــاقـــــــة Fluoscence Resonance Energe Tranfer (FRET) .


الصبغة المراسلة تكون صبغة مخلقة للون مثل FAM والصبغة الماصة تكون صبغة مخلقة للون مثل TAMRA وبالامكان ان تكون الصبغة مظلمة تمتص الفلورسنت من الصبغة المراسلة وتطلق طاقة حرارية مثل Methyl Red و DABCYL ، وبالتالي ترتفع نسبة الفلورسنت المنبعثة من الصبفة المراسلة FAM بشكل غير عكسي وتنخفض في المقابل نسبة الفلورسنت المنبعث من الصبغة الماصة TAMRA .


هذه الكواشف تعمل بشكل جيد في التطبيقات الكمية والنوعية لتقنية الزمن الحقيقي لتفاعل التسلسل المتبلمر كذلك الكشف عن الطفرات الوراثية بتصميم كواشف يتم تهجينها بشكل انتقائي متخصص للكشف عن الاختلاف في قاعدة نتروجينية واحدة .


تحياتي
ستالين