يتم تحضير هذا التفاعل بخلط العديد من العناصر ومن ثم اضافة الماء المقطر او المحلول المنظم TE للحصول على الحجم والتركيز المطلوب لكل هذه العناصر .
من اهم العناصر وجود بادئتين (Primers) وهما عبارة عن تسلسل قصير من الحمض النووي الوراثي يلتصق بطرف المنطقة المراد تكبيرها .
البادئة تقوم بتعريف الجزء المطلوب نسخه من الحمض النووي الوراثي ، ويصنع كميائيا من نيوكليتيدات (Olignucleotide) توضع بتركيز عالي في المحلول مقارنة بكمية الحمض النووي الوراثي لضمان استمرارية التفاعل .
العنصرالآخر هو عينة الحمض النووي الوراثي التي يتم نسخ مناطق معينة فيها بوضع تتابعات كل منها يحتوي على اربع قواعد نيتروجينية، ويقوم انزيم البوليميريز باضاة هذه القواعد بطريقة صحيحة بناءا على تسلسل القواعد النيتروجينية في الحمض النووي الوراثي .
انزيمات البوليميريز الثابتة عند درجات الحرارة العالية مثل درجة التشويه (Denaturation) والتي تقارب درجة الغليان لها اكبر الاثر في نجاح عملية PCR .
من اكثر هذه الانزيمات شيوعا انزيم Taq والذي يتم استخلاصه من بكيريا توجد في مياه الينابيع الحارة تسمى Thermus Aquaticus.
من الشائع عند فحص عدد من العينات تحتوي على نفس البادئات ونفس عناصر التفاعل الاخرى تحضير محلول يسمى (MasterMix) والذي يوزع بشكل متساوي في جميع انابيب التفاعل (0.2ml) ، مما يضمن صحة توزيع جميع عناصر التفاعل في كل انبوب وتجانس العينات مع بعضها البعض ، لان الهدف من فحص العينات هو ايجاد اوجه الاختلاف او التطابق بين عينات الحمض النووي الوراثي وليس ايجاد المتغيرات بين عناصر التفاعل او طرق تحضير العينات .
تحياتي
ستالين
المواضيع المتشابهه
مكونات سلسلة التفاعل المبلمر Pcr
العرض العادي
