تشترك عدة عناصر في عملية الفصل هذه , مثل الانبوب الزجاجي الشعري المصنوع من السيليكا وانبوبتي المحلول المنظم التي تقع احداهما بمحاذاة القطب الموجب والاخرى بمحاذاة القطب السالب لتوصيل الدائرة الكهربائية , واخيرا مصدر عالي للطاقة الكهربائية .
وجود مجموعة الفوسفات في كل نيوكليتيد يجعل جزيء الحمض النووي الوراثي يحمل شحنة سالبة وتعتبر هذه الشحنة ثابتة مقارنة بحجم قطعة الحمض النووي الوراثي فمثلا قطعة مكونة من عشرة نيوكليتيدات تسحب باتجاه القطب الموجب مثل قطعة اخرى لها مئة نيوكليتيد .
ولفصل الاحجام المختلفة من هذه القطع يتم فصلها على البوليمر الذي يعمل كوسط يمنع حدوث ظاهرة الكهرباء الساكنة مع الجدار الداخلي للانبوبة الشعرية مما يسمح بمرور نواتج التكبير حسب احجامها .
وتختلف عملية الفصل في مادة الجل عن مادة البوليمر حيث يتضح ذلك من خلال دراسة نموذج اوجستن (Ogston Sieving) الذي يوضح الميكانيكية التي تتحرك بها القطع الصغيرة التي تمر بسرعة من خلال هذه الشبكة بينما تمتد القطع الكبيرة لتشكل قطع ممتدة طوليا تتحرك بطريقة مشابهة لحركة الثعبان والتي يصفها نموذج (Reptation Model) لتمر بسهولة من خلال فتحات الجل بينما لا تمر نواتج التكبير من خلال مادة البوليمرالموجود في الانبوبة الشعرية بل عليها لانها لا تحتوي على مسامات مثل الجل .
تتكون عملية الفصل الكهربائي داخل الانبوب الشعري من اربعة مراحل هي : التعبئة والحقن والفصل الكهربائي وعملية الكشف عن النواتج المفصولة وتحديدها , ويتحكم في هذه الوظائف ملف يسمى Module والذي يحتوي على ضوابط يقوم الجهاز بموجبها بتنفيذ هذه الخطوات وهنالك ملف اخر يسمى قائمة الحقن ينظم تطبيقات تعليمات الملف السابق على العينات حسب ترتيبها في القائمة .
وهذه المراحل الاربعة على النحو التالي :
• التعبئة :
يقوم ذراع الي بحقن البوليمر الموجود في الابرة الزجاجية عبر سدادة المضخة Pump Block الى الانبوبة الشعرية , ويغلق الصمام الموجود بمحاذاة القطب الموجب للتاكد من ان البوليمر المحقون سيتجه بشكل صحيح الى الانبوبة الشعرية.
• الحقن :
تنتقل نواتج التكبير بواسطة عملية حركية كهربائية Electrokinetic من انبوب العينة الى الانبوبة الشعريةوتتم العملية بغمس الانبوبة الشعرية والقطب السالب في انبوبة العينة ومن الجهة الاخرى يتم فتح الصمام الموجود في سدادة المضخة بمحاذاة القطب الموجب المغموس في انبوبة المحلول المنظم لتتصل الدائرة الكهربائية ويطبق تيار كهربائي في وقت معين لحقن كمية كبيرة من العينة داخل الانبوبة الشعرية .
• الفصل الكهربائي :
بعد الانتهاء من حقن العينة ينتقل القطب السالب والانبوبة الشعرية الى انبوبة المحلول المنظم الموجودة في منظم العينات AutoSampler وتتصل الدائرة الكهربائية بين القطب السالب والقطب الموجود في انبوب المحلول المنظم الموجود في سدادة المضخة Pump Block ويطبق جهد كهربائي عالي التيار ودرجة حرارة معينة للتأكد من جريان نواتج التكبير خلال الانبوبة الشعرية في وقت محدد .
• الكشف عن النواتج المفصولة :
عندما يتم مرور نواتج التكبير المفصولة على النافذة الزجاجية للانبوبة الشعرية يقوم الليزر باستثارتها وتقوم كاميرا CCD بفصل الالوان المنبعثة من هذه العملية وتحويلها الى اشارات الكترونية يقوم برنامج جمع البيانات Data Collection بعرضها على شكل قمم تختلف احجامها باختلاف نسبة الفلورسنت المنبعثة ونستطيع رؤية هذه البيانات خلال عملية الفصل الكهربائي .
تحياتي
ستالين
المواضيع المتشابهه
عملية الفصل الكهربائي Capillary Electrophoresis
.gif)
العرض العادي
