طريقة الفينول كلوروفورم (الاستخلاص العضوي)

الاستخلاص العضوي يتضمن اضافة متتابعة للعديد من المواد الكيميائية ، فيضاف اولا محلول يحتوي على مادة (SDS) Sodium Dodecyl Sulfate ومادة Proteinase K لتحطيم جدار الخلية وتحطيم البروتينات مثل البروتين (Histone) الذي يلتف حوله الحمض النووي الوراثي خلال تشكله داخل الكروموسوم ، ثم يضاف مخلوط الفينول كلوروفوم لفصل الحامض النووي الوراثي عن البروتينات لانه يذوب في الماء بصورة اكبر من ذوبانه في الفينول كلوروفورم .

بعدها تتم عملية ترشيح من خلال Centricon وتستخدم عملية التركيز هذه بدلا من الترسيب بالايثانول وذلك للتخلص من المواد المثبطة مثل مادة الهيموجلوبين الموجودة في كريات الدم الحمراء .

وعلى الرغم من ان هذه الطريقة تنتج كمية من الحامض النووي الوراثي ذات وزن جزيئي عالي الا انها تستغرق وقتا طويلا اضافة الى خطورة المواد المستخدمة و السمية العالية وعرضة العينات للتلوث اثناء نقل العينة من انبوب لآخر .



تحياتي
ستالين

[مسلم المصرى]

[frame="2 98"]
جزاكم الله خيراً أخى الاميرال ستالين على هذه المعلومات الهامه وجعلها الله فى ميزان حسناتك

[/frame]

[Glutathione]

شكرا جزيلا على المعلومات
و لكن عند معالجة العينه بالفينول و الكلوروفورم
فتتم كالتالي :
يستعمل عادة خليط يسمى Phenol-chloroform-isomylalcohol و هذا السائل عباره عن طبقتين : طبقه علويه و هي الكلوروفوم و الايزومايل و طبقه سفليه و هي الفينول

يتم استعمال الفينول اولا مع العينه و يتم خلط العينه تماما في الفينول ثم نقوم بعملية الطرد المركزي للعينه .. يتم نقل الطبقه المائيه من العينه الى انبوب جديد ثم يضاف الكلوروفورم و يخلط جيدا مع العينه و بعد ذلك يطرد مركزيا و يتم نقل الطبقه المائيه الى انبوب جديد ثم يتم ترسيب ال DNA اما بال isopropanol أو با sodium acetate