المرجع المجهول هو صبغة ROX الموجودة في المحلول المنظم 10X Taq Man Buffer ولايتأثر بنشاط وحدة الازالة الخاصة بالانزيم المبلمر خلال تفاعل التسلسل المبلمر .
الهدف من وضع هذه الصبغة هوتطبيع Nomalize اشارة الصبغة المراسلة خلال عملية تحليل البيانات ، وعملية التطبيع هذه ضرورية لتصحيح التذبذب والاختلاف في شدة الفلورسنت المنبعث من صبغة FAM نتيجة التغير في تركيز او حجم العينة .
ويتم حسابها رياضيا بقسمة شدة الفلورسنت للصبغة المراسلة FAM على شدة الفورسنت للصبغة المجهولة ROX لنحصل على نسبة تطبيع الصبغة المراسلة Rn .
ويعتبر مقدار التغير في Rn الفرق بين RN+ (في وجود الحمض النووي الوراثي) وبين Rn_ (في عدم وجود الحمض النووي الوراثي) .
تحياتي
ستالين