عرض مشاركة واحدة
 
 
قديم 04-09-2008, 06:29 PM   #1
الاميرال ستالين
ضيف

 






Messenger البداية الساخنة للتفاعل المبلمر Pcr

الانزيم المبلمر العادي يظهر نوعا من النشاطات تحت درجة الحرارة المثالية وهي 72 درجة مئوية لانزيم TaqPolymerase ، وبالتالي فان البادئات تلتصق بشكل عشوائي (غير متخصص) في اشرطة الحمض النووي الوراثي في درجة حرارة الغرفة العادية اثناء تحضير العينات ، مما يؤدي الى ظهور نواتج غير مخصصة بالتسلسل المطلوب .


ومن الممكن في درجة حرارة منخفضة ان ترتبط البادئات مع بعضها البعض لتكون نواتج تسمى البادئة المزدوجة Primer Dimer لها احجام اصغر من احجام النواتج الطبيعية لتفاعل PCR أي انها تكبر بشكل تنافسي ، اذا ظهرت مثل هذه النواتج الغير مرغوبة سوف يتم تكبيرها من خلال دورات التفاعل المتبقية ولن يتم تكسير مناطق الحمض النووي الوراثي المطلوبة بفعالية لان الانزيم المبلمر مشغول بتكبير تلك النواتج المنافسة (الغير مرغوبة) .


يتم تفادي مثل هذه النواتج حيث يبدأ التفاعل عند درجة حرارة مرتفعة فقط ، وهو مايسمى بالبداية الساخنة .. يتم تصميم هذه البداية الساخنة عن طريق التحكم بعنصر مهم من عناصر التفاعل مثل الانزيم المبلمر .


بعد ان يتم رفع درجة الحرارة فوق درجة ارتباط البادئة المطلوبة ةهي 60 درجة مئوية وهذا يقلل الارتباط العشوائي للبادئات بشريطي الحمض النووي الوراثي واستطالتهما في غياب الانزيم ، لهذا السبب تم تصميم انزيم لايمكن ان يكون نشطا الا عند درجة حرارة عالية مما يضمن عدم ظهور النواتج الغير مرغوب فيها .. ولقد تمت تسمية هذا الانزيم المطور بانزيم AmpliTaq Gold .

تحياتي
ستالين



من مواضيع الاميرال ستالين في المنتدى

   
رد مع اقتباس