منتديات الكيمياء الحيوية للجميع

منتديات الكيمياء الحيوية للجميع (http://www.biochemistry4all.com/forums/index.php)
-   اظهار الانماط الوراثية (http://www.biochemistry4all.com/forums/forumdisplay.php?f=72)
-   -   مراحل عملية فحص حمض الميوكوندريا الوراثي (http://www.biochemistry4all.com/forums/showthread.php?t=11082)

الاميرال ستالين 04-09-2008 08:21 PM

مراحل عملية فحص حمض الميوكوندريا الوراثي
 

تتكون عملية الفحص من ثماني مراحل هي الاستخلاص والقياس والتكبير وعملية تنقية نواتج التكبير وتقدير كميتها وتفاعل التسلسل وعملية تنقية نواتج التفاعل واظهار النمط الوراثي .



عملية التكبير


يتم الاستخلاص بالطرق المعتادة (( عن طريق خطوات العمل المثالية للاستخلاص SOP )) ثم تقاس كمية حمض الميتوكوندريا الوراثي باستخدام تقنية QuantBlot , وبناءا على تركيز العينة يتم تكبيره .


توصي مختبرات مكتب التحقيقات الفيدرالي اذا امكن بوجود 100 بيكوجرام من العينة في الظروف المثالية لبدء عملية التكبير , وتتواجد في الاسواق عبوات جاهزة تحتوي على العناصر الضرورية للتفاعل حيث يتبقى ان نضيف الحمض النووي الوراثي ونضيف زوج البادئات التي نصممها حسب المنطقة التي نرغب بمعرفة تسلسلها (L15 & H16 for HV1) ولابد ان تتوافر اربع خصائص في هذه البادئات حتى تكون ملائمة لعملية التكبير كما يلي :


• ان تحتوي على عدد متوازن من قواعد GC و AT .
• تجنب التسلسل الذي يعتقد ان يكون مركبات ثانوية .
• تجنب التكرار الطويل لقاعدة واحدة .
• ان تكون درجة حرارة الالتصاق من 50 – 60 درجة مئوية .
درجة حرارة الالتصاق = 5 – {(عدد GC X 4 )+ ( عدد AT X 2 )}.




عملية الكشف عن نواتج التكبير وتنقيتها

تتم تنقية العينة باستخدام MicroconTM100 او باستخدام
Q1A quickTMspin purification kit وذلك باتباع التعليمات المرفقة مع المنتج .



عملية اظهار الانماط الوراثية لحمض الميوكوندريا الوراثي


البرامج المستخدمة في عملية الفصل الكهربائي لنواتج تفاعل التسلسل هي برنامج جمع المعلومات Data Collection المستخدم في فصل واظهار الانماط الوراثية لمورثات STR. وبعد الانتهاء من جمع البيانات يستخدم برنامج Sequence Analysis لاظهار الانماط الوراثية .



تحياتي
ستالين


الساعة الآن 12:07 PM

Powered by vBulletin® Version 3.8.7
Copyright ©2000 - 2022, vBulletin Solutions, Inc.