walaa nagib
08-15-2007, 03:49 PM
السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
اختبار الكشف عن الخلايا المنجلية (ٍSickling Test)
الهدف من الاختبار:
يحدد هذا الاختبار وجود فقر الدم المنجلي أو عدمه , وفقر الدم المنجلي حالة من حالات فقر الدم , والتي تظهر فيها كريات الدم الحمراء على شكل المنجل.
وذلك نظراً لوجود كمية من الهيمو جلوبين الغير طبيعي التي تؤدي إلى ترسيبه على شكل الكريستال في حالة نقص الأكسجين في الدم مما يعطي كريات الدم الحمراء شكل المنجل
توجد طريقتان للكشف عن الخلايا المنجلية بالمختبر :
الطريقة الأولى:
بإستخدام محلول Sickling solution - (Solubility Method)1
طريقة العمل:
1- يوضع 2 ملم من محلول الـ Sickling solution في انبوبة اختبار نظيفة.
2- يوضع 25 ميكروليتر من عينة الدم ببطء على المحلول السابق.
3- تُـحرك الانبوبة برفق شديد حتى تمتزج كمية الدم بالمحلول.
4- تترك الانبوبة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ’ ثم تقرأ النتيجة بعد ذلك.
* كيفية قراءة النتيجة :
- عند وجود عكارة في الانبوبة بحيث إذا وضع خطين باللون الاسود كخلفية للأنبوبة لايمكن رؤيتها بوضوح تعتبر النتيجة إيجابية.
- أما إذا كانت الانبوبة صافية أو رائقة ويمكن رؤية الخطوط تعتبر النتيجة سلبية.
* شرح تأثير المحلول:
يعمل محلول الـ Sickling solution على تكسير كريات الدم الحمراء وبالتالي في وجود الهيموجلوبين (S) يصبح المحلول معكر نظراً لأن هذا النوع من الهيموجلوبين لايذوب في المحلول (Sickling solution).
أما في حالة وجود هيموجلوبين طبيعي فأنه يذوب في المحلول وتصبح الأنبوبة صآفية.
الطريقة الثانية:
باستخدام الشريحة الزجاجية (السلايد).
طريقة العمل:
1- توضع قطرة من الدم في منتصف شريحة زجاجية نظيفة.
2- يوضع عليها غطاء الشريحة (Cover glass) بطريقة تمنع من تكون فقاعات الهواء تحت الغطاء .
(في حالة تكون فقاعات هوائية يمكن الضغط على الغطاء حتى خروج الفقاعات).
3- يتم وضع (الفازلين أو الشمع أو الكندا بلسم) على حواف الـ (Cover glass) حتى لايتسرب الهواء إلى الداخل.
4- تترك الشريحة الزجاجية في الحضانة عند 37 درجة مئوية ولمدة 24 ساعة.
5- تفحص الشريحة بعد التحضين بواسطة الميكروسكوب تحت العدسة الزيتية.
* كيفية قراءة النتيجة:
- في حالة الإيجابية تاخذ كرات الدم الحمراء شكل المنجل.
- في حالة السلبية لايتغير شكل كريات الدم الحمراء وتبقى كما هي.
شرح مايحدث في هذه الطريقة :
يمنع الـ (Cover glass) مع وجود الشمع على الحواف الخارجية له من دخول الأكسجين إلى الداخل كما ان زيادة فترة التحضين لمدة 24 ساعة تؤدي إلى استهلاك الأكسجين الموجود تحت غطاء الشريحة الـ (Cover glass) وبالتالي في حالة وجود كريات الدم الحمراء المنجلية فإنه يحدث ترسيب للهيموجلوبين بداخلها نتيجة للنقص الحاصل في الأكسجين مما يعطيها شكل المنجل.
أما في حالة وجود كريات الدم الحمراء الطبيعية فإنه لايحدث تغير في شكلها عند نقص الأكسجين.
يتم إضافة محلول الـ (Sodium dithionite) إلى قطرة الدم فيساعد هذا المحلول على سحب الاكسجين من الدم وبالتالي يؤدي ذلك إلى اخذ كريات الدم الحمراء الشكل المنجلي في فترة وجيزة , ويمكن في هذه الحالة قراءة نتيجة الاختبار خلال ساعة من الزمن.
اختبار الكشف عن الخلايا المنجلية (ٍSickling Test)
الهدف من الاختبار:
يحدد هذا الاختبار وجود فقر الدم المنجلي أو عدمه , وفقر الدم المنجلي حالة من حالات فقر الدم , والتي تظهر فيها كريات الدم الحمراء على شكل المنجل.
وذلك نظراً لوجود كمية من الهيمو جلوبين الغير طبيعي التي تؤدي إلى ترسيبه على شكل الكريستال في حالة نقص الأكسجين في الدم مما يعطي كريات الدم الحمراء شكل المنجل
توجد طريقتان للكشف عن الخلايا المنجلية بالمختبر :
الطريقة الأولى:
بإستخدام محلول Sickling solution - (Solubility Method)1
طريقة العمل:
1- يوضع 2 ملم من محلول الـ Sickling solution في انبوبة اختبار نظيفة.
2- يوضع 25 ميكروليتر من عينة الدم ببطء على المحلول السابق.
3- تُـحرك الانبوبة برفق شديد حتى تمتزج كمية الدم بالمحلول.
4- تترك الانبوبة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ’ ثم تقرأ النتيجة بعد ذلك.
* كيفية قراءة النتيجة :
- عند وجود عكارة في الانبوبة بحيث إذا وضع خطين باللون الاسود كخلفية للأنبوبة لايمكن رؤيتها بوضوح تعتبر النتيجة إيجابية.
- أما إذا كانت الانبوبة صافية أو رائقة ويمكن رؤية الخطوط تعتبر النتيجة سلبية.
* شرح تأثير المحلول:
يعمل محلول الـ Sickling solution على تكسير كريات الدم الحمراء وبالتالي في وجود الهيموجلوبين (S) يصبح المحلول معكر نظراً لأن هذا النوع من الهيموجلوبين لايذوب في المحلول (Sickling solution).
أما في حالة وجود هيموجلوبين طبيعي فأنه يذوب في المحلول وتصبح الأنبوبة صآفية.
الطريقة الثانية:
باستخدام الشريحة الزجاجية (السلايد).
طريقة العمل:
1- توضع قطرة من الدم في منتصف شريحة زجاجية نظيفة.
2- يوضع عليها غطاء الشريحة (Cover glass) بطريقة تمنع من تكون فقاعات الهواء تحت الغطاء .
(في حالة تكون فقاعات هوائية يمكن الضغط على الغطاء حتى خروج الفقاعات).
3- يتم وضع (الفازلين أو الشمع أو الكندا بلسم) على حواف الـ (Cover glass) حتى لايتسرب الهواء إلى الداخل.
4- تترك الشريحة الزجاجية في الحضانة عند 37 درجة مئوية ولمدة 24 ساعة.
5- تفحص الشريحة بعد التحضين بواسطة الميكروسكوب تحت العدسة الزيتية.
* كيفية قراءة النتيجة:
- في حالة الإيجابية تاخذ كرات الدم الحمراء شكل المنجل.
- في حالة السلبية لايتغير شكل كريات الدم الحمراء وتبقى كما هي.
شرح مايحدث في هذه الطريقة :
يمنع الـ (Cover glass) مع وجود الشمع على الحواف الخارجية له من دخول الأكسجين إلى الداخل كما ان زيادة فترة التحضين لمدة 24 ساعة تؤدي إلى استهلاك الأكسجين الموجود تحت غطاء الشريحة الـ (Cover glass) وبالتالي في حالة وجود كريات الدم الحمراء المنجلية فإنه يحدث ترسيب للهيموجلوبين بداخلها نتيجة للنقص الحاصل في الأكسجين مما يعطيها شكل المنجل.
أما في حالة وجود كريات الدم الحمراء الطبيعية فإنه لايحدث تغير في شكلها عند نقص الأكسجين.
يتم إضافة محلول الـ (Sodium dithionite) إلى قطرة الدم فيساعد هذا المحلول على سحب الاكسجين من الدم وبالتالي يؤدي ذلك إلى اخذ كريات الدم الحمراء الشكل المنجلي في فترة وجيزة , ويمكن في هذه الحالة قراءة نتيجة الاختبار خلال ساعة من الزمن.